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腺病毒包裝

簡(jiǎn)要描述:腺病毒(Adenovirus)是目前*可靠的重組病毒表達(dá)系統(tǒng)之一,可用于在哺乳細(xì)胞中瞬時(shí)及高水平地表達(dá)shRNA或目的蛋白。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-05-13
  • 訪  問(wèn)  量:3572
       腺病毒(Adenovirus)是目前可靠的重組病毒表達(dá)系統(tǒng)之一,可用于在哺乳細(xì)胞中瞬時(shí)及高水平地表達(dá)shRNA或目的蛋白。其具備以下優(yōu)點(diǎn):
  1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列哺乳動(dòng)物細(xì)胞,除可感染幾乎所有人的細(xì)胞類型外,還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。
  2. 因腺病毒的感染不依賴細(xì)胞周期,故其既可以感染增殖細(xì)胞也可以感染非增殖細(xì)胞。
  3. 腺病毒具有嗜上皮細(xì)胞特性,因大多數(shù)腫瘤細(xì)胞均屬于上皮細(xì)胞,這使得腺病毒非常適合應(yīng)用于基因治療領(lǐng)域。
  4. 病毒滴度高,可用于動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn)。
  5. 有較好的生物安全性。腺病毒攜帶的基因不會(huì)整合到宿主細(xì)胞基因組中;實(shí)驗(yàn)中雖然會(huì)有一定機(jī)率出現(xiàn)RCA(即復(fù)制型腺病毒),但由于大多數(shù)成人體內(nèi)都有針對(duì)腺病毒的抗體,所以一般危害不大。

技術(shù)要點(diǎn)

重組腺病毒的包裝制備:重組腺病毒是從由侵染色斑組成單位(pfu)中分離獲得的。一個(gè)單色斑是線性載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后在20×15 cm板上由293A細(xì)胞連續(xù)侵染后被挑選和擴(kuò)增形成的。重組腺病毒可通過(guò)超速離心純化,并測(cè)定滴度及進(jìn)行PCR鑒定。純化后重組腺病毒的滴定濃度為1010pfu/ml,獲得的量為2-4 ml。
重組腺病毒的特性:一般的,單個(gè)腺病毒通常是在30×150mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中制備的。
獲得量:1×10病毒顆粒/細(xì)胞
滴定濃度:1×1010~1×1012個(gè)病毒基因組/ml
zui終體積:1 ml純化后的病毒液(儲(chǔ)存于PBS)
儲(chǔ)存:批量?jī)?chǔ)存的*條件為-80°C
幾種病毒載體的區(qū)別:

腺病毒表達(dá)系統(tǒng)
慢病毒表達(dá)系統(tǒng)
逆轉(zhuǎn)錄病毒
病毒基因組成
雙鏈DNA
單鏈RNA
單鏈RNA
載導(dǎo)容量
< 8 kb
< 8 kb
< 6kb
基因整合功能
無(wú)。病毒基因組游離于宿主基因組外,瞬時(shí)表達(dá)外源基因
有。病毒基因組整合于宿主基因組,長(zhǎng)時(shí)間、穩(wěn)定表達(dá)外源基因
有。
表達(dá)豐度
高水平表達(dá)
表達(dá)時(shí)間
快(1-2天)
慢(2-4天)
快(1-2天)
感染細(xì)胞類型
分裂和不分裂細(xì)胞
分裂和不分裂細(xì)胞。適用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞
感染分裂細(xì)胞,但在干細(xì)胞中表達(dá)效率低
滴度TU/ml
10^12
10^9
10^9
四環(huán)素誘導(dǎo)系統(tǒng)
不可以
TET-ON , TET-OFF
不可以
毒性作用
細(xì)胞毒性
遺傳毒性
遺傳毒性
免疫原性
高免疫原性
低免疫原性
低免疫原性
動(dòng)物模型
不能得到轉(zhuǎn)基因動(dòng)物
可產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,效率達(dá)50以上
可以,但很難
安全系數(shù)
能否用于MIRCORNA
可以
可以
不可以
RNAi
病毒進(jìn)入細(xì)胞往往引起細(xì)胞內(nèi)干擾素反應(yīng),不適合做RNAi實(shí)驗(yàn)
適合,是RNAi實(shí)驗(yàn)的優(yōu)選工具
可以用作RNAi實(shí)驗(yàn)
基因過(guò)表達(dá)
包裝容量較大。可以滿足較大基因的包裝,是過(guò)表達(dá)基因的優(yōu)選工具
包裝容量有限,過(guò)表達(dá)的基因過(guò)大時(shí),病毒滴度受到影響
包裝容量有限,過(guò)表達(dá)的基因過(guò)大時(shí),病毒滴度受到影響
常見(jiàn)應(yīng)用
1、體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)2、基因治療
1、體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)2、基因治療
體外細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo),突變篩選,功能基因庫(kù)構(gòu)建 

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